新鲜实体组织单细胞悬液制备

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摘要:流式细胞术对细胞的各种参数分析必须基于单细胞的基础上，根据不同实体组织成分的特点可选择不同的分散细胞的方法，以期达到单细胞产量高、细胞损伤小的目的。在实体组织分散为单细胞的过程中，解离的方法有可能瞬间或持久地影响细胞的性质，比如，形态上显而易见的细胞膜破损，细胞表面上可出现泡状特征，还有一些是难以观察到的线粒体活性的变化、选择性膜表面抗原的丢失、蛋白质的丢失等，细胞受损程度受温度、pH值、处理时间等多种因素的影响。机械性或人工制备的单细胞，在某些性质上很可能已改变了原组织细胞特性，因此处理不同组织时，努力摸索方法，尽可能采用对细胞损伤小产率较高的单细胞悬液制备方法，最大限度地保持细胞原有特性。下面介绍几种细胞悬液制备方法，仅供参考。（一）酶消化法酶的作用原理主要有三方面：一是破坏组织间的胶原纤维、弹性纤维等，二是水解组织细胞的紧密连接结构的蛋白质，三是水解组织粘多糖物质。酶消化法是实体组织分散为单细胞的主要方法之一。常用的酶类有：胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、溶菌酶、弹性蛋白酶等。可根据分散的组织类型确定使用的酶类。需要注意的是使用条件和影响因素（酶浓度、酶效价、作用时间、pH值）等，如胃蛋白酶在碱性环境下失去活性，胰酶在中性溶液中活性欠佳。酶消化法常规程序如下：1、将适合于酶消化的组织置于离心管中。2、将选好的酶溶液1～2ml加入盛有被消化组织的试管中。3、常规消化20～30min（恒温37℃或室温），消化期间间断振荡或吹打。4、终止消化，收集细胞悬液，以300目尼龙网过滤，除去细胞，以低速离心除去细胞碎片。6、将制备好的单细

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