实验2-高效液相色谱法测定栀子药材中栀子苷的含量

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摘要:实验2高效液相色谱法测定栀子药材中栀子苷的含量学时分配：6学时实验目的和要求1.掌握高效液相色谱法的基本原理及操作步骤；2.熟悉高效液相色谱法在中草药有效成分测定中的应用。实验原理高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相，泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入色谱柱，在柱内各组分被分离后,依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填充剂和流动相的组分应按待测组分的性质而定，常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。除另有规定外，柱温为室温，检测器有紫外检测器，二极管阵列检测器，示差折光检测器等。影响色谱分离效率有两大主要因素，其一为热力学因素,如不同组分容量因子(K’)，其二是动力学因素,如色谱峰的展宽。反映这些物理过程的指标是保留时间和理论塔板数(N)。其中K’=tR-to/to；n=5.54(tR/W1/2)2密切注视和努力解决这两个因素引起的矛盾，组分间的分离就成功了，分离的表现指标是分离度“R”。R=2(t2-t1)/(Wb1+Wb2)实验条件1.仪器：高效液相色谱仪，超声波清洗器，ZorbaxC18柱（4.6×250mm）。2.试剂：栀子苷对照品，乙睛，甲醇，水。实验内容1.色谱条件：色谱柱：ZorbaxC18柱（4.6×250mm）；流动相：乙睛—水（15:85）；检测波长：238nm，流速：1mL/min。2.对照品溶液的制备和标准曲线的绘制：精密称取栀子

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