细胞复苏及冷冻

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摘要:细胞培养基及冻存液的配制细胞培养基的配制：注意事项：为了避免不小心污染造成的浪费，一般用50ml管分装配制。配置比例：45ml培养基（90%的总体积比例）+5mlFBS（血清，10%的总体积比例）+500μL双抗（1:100的比例）双抗：链霉素+青霉素——抑制细菌生长。细胞冻存液的配制：配置比例：5mlDMSO（100%纯度，以10%总体积的比例）+45ml已配好的培养基（90%的总体积比例）注意事项：刚配好的细胞冻存液会发热，需用封口膜封住瓶盖后（防止细菌污染）放入冰箱冷冻后再使用。过热的冻存液会使得细胞死亡？？冻存液一般提前一天配好即可，放置太久会DMSO二甲基亚砜（Dimethylsulfoxide）：是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，因其抗冻作用，可用于细胞的冻存；细胞冻存操作步骤：1、打开水浴锅，将培养基和冻存液用封口胶封好加热至37℃。2、用酒精喷壶消毒（手及洁净工作台表面，进入工作台为防止污染均需酒精喷壶消毒）；从培养箱中取出要冻存细胞的培养皿。3、用移液管吸出培养基，弃至废液缸（注意移液管勿碰到废液缸壁或其他物品，避免污染；移液管用完后倒插放置待用）。4、在培养皿中加入约10ml的PBS缓冲液冲洗，用移液管吸除（移液管此时可以扔掉），若有剩余的少量液体，用移液枪吸除。5、加入1ml的TE，使得细胞消化（解除贴壁状态），摇匀液体后放入培养箱中5min。6、镜下观察细胞是否消化（即由扁平的伸展状态变回圆润的收缩状态；此步骤不可省略）。7、在每个培养皿中均加入4ml培养基，打匀后吸入50ml离心管（因为

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