病毒核酸检测流程

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摘要:病毒核酸实验室检测步骤具体操作如下：1.病毒采样：取病人唾液或者鼻咽拭子于病毒采样管保存，常用的采样管中病毒保存液分灭活型与非灭活型，以下为德晟生产的病毒保存液两种型号：1)灭活型：灭活病毒保存液的颜色为透明的，它的特点是可以杀死病毒，保留核酸片段，一般用来检测新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒及甲乙流感等此图为灭活病毒保存液2)非灭活型：非灭活病毒保存液不含裂解液，可保留病原体的活性与完整性，颜色为粉红色，它主要应用于病毒的培养和繁殖，使检测结果更精准此图为非灭活病毒保存液采样操作步骤2.核酸提取：提取病人唾液或者鼻咽拭子样本里的遗传物质，如果病人携带病毒，则样本里就会有该病毒的遗传物质RNA,使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-70℃或液氮保存。3.逆转录合成cDNA:进行提取液中RNA的逆转录，把RNA逆转录成cDNA逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。建议使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反

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