2+CHO+ko+cell+line

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摘要:CHO-敲除细胞系简介：CHO细胞又称中国仓鼠卵巢细胞，是一种来源于中国仓鼠卵巢的上皮细胞系。中国仓鼠卵巢（CHO）细胞以其独特的特性，已成为制备治疗性重组蛋白的主要工具。这种细胞系通常用于生物学和医学研究。同时，它也是最广泛使用的哺乳动物宿主在工业生产治疗蛋白方面。应用程序：基因打靶法构建基因敲除CHO细胞系由于CHO细胞系是治疗性抗体产生的主要宿主，构建高效的CHO细胞系具有重要意义。在构建CHO细胞系中，常用的转染方法有两种，一种是随机整合法，另一种是基因靶向法。前者导致抗体产生率的变化，通常会影响转基因表达水平。然而，在基因打靶方法中，外源基因被插入特定的染色体区域。这种方法是基于利用针对宿主细胞特定基因组区域的序列进行同源重组。研究人员利用CRISPR/Cas9系统作为基因靶向方法，通过引导RNA和Cas9诱导双链断裂，提高同源重组效率。因此，CRISPR/Cas9载体系统可以有效地将外源基因插入CHO细胞系中。利用谷氨酰胺合成酶基因敲除细胞提高CHO细胞系的产生效率尽管中国仓鼠卵巢（CHO）细胞以其独特的特性，已经成为制造治疗性重组蛋白的主要工具，但如何有效地鉴定这些稀有的CHO细胞系是CHO细胞系产生的主要挑战之一，在大量低产和低产无性系中的高产无性系。目前，有两种主要的CHO表达系统被广泛应用，基于二氢叶酸还原酶（DHFR）的甲氨蝶呤（MTX）选择和基于谷氨酰胺合成酶（GS）的甲硫氨酸硫氧胺（MSX）选择。为了研究内源性GS表达对选择效率的潜在影响，采用锌指核酸酶（ZFN）技术，以内源性CHO-GS基因为靶点，构建了GS基因敲除CHOK1

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