线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性检测试剂盒说明书-50T-48S-可见分光光度法

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摘要:北京索莱宝科技有限公司线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性检测试剂盒说明书50T/48S可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号：BC0940规格：50T/48S产品内容：提取液：液体80mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体21mL×2瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×2支，-20℃保存；试剂三：粉剂×2支，4℃保存；工作液的配制：临用前取试剂一、试剂二、试剂三各一支，将试剂二和试剂三依次转移到试剂一中混合溶解。产品说明：线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C的氧化，并最终把电子传递给氧生成水。还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。操作步骤：一、复合体Ⅳ的提取：1称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。24℃600g离心10min。3将上清液移至另一离心管中，4℃11000g离心15min。第1页，共3页北京索莱宝科技有限公司4上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。5在沉淀中加入400uL提取液，超声波破碎（功率20％，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于复合体Ⅳ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。二、测定步骤：1、可见分光光度计预热30min

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